Pada film Mangkujiwo 2 ini, digambarkan bahwa Mangkujiwo telah bekembang menjadi perkumpulan besar yang telah menerima banyak pengikut.
Mereka gemar memelihara kuntilanak sebagai medium memperkaya diri.
Kemudian munculah sosok perempuan cantik bernama Karmila.
Karmila memiliki maksud untuk menghancurkan perkumpulan tersebut.
Upaya tersebut ia lakukan dengan mendekati Brotoseno yang mesti bergantung kepada kuntilanak.
Dibantu dengan Nyi Kenangan, Brotoseno yang haus akan kekuasaan dibujuk untuk bersekutu dengan makhluk gaib.
Sejak itu, teror dan ritual mulai marak dilakukan hingga menghantui orang-orang yang mengikuti perebutan kekuasaan yang mematikan tersebut.
Banyak korban yang dihasilkan dari ambisi mereka menjadikan Mangkujiwo menjadi lebih berkuasa.